#paper doi: 10.1016/j.nbt.2011.03.014. Single B cell antibody technologies. 该文章是2011年发表的关于单B细胞抗体筛选的综述文章。 1.单克隆抗体 (mAb)简介和医用价值：诊断，治疗试剂（癌症、自身免疫性疾病和传染病） 2.制备单B细胞mAb技术： （1）杂交瘤技术制备鼠源mAb：基于B细胞融合，免疫小鼠的B细胞与骨髓瘤细胞的融合；缺点：有害免疫反应，缺乏足够的效应功能 （2）鼠源mAb改造：鼠源恒定区和框架区替换为人源序列； （3）人源单克隆抗体：人源抗体谱系的免疫球蛋白（Ig）-->转基因小鼠衍生的杂交瘤B细胞系-->回收；缺点：无法展现出人类天然抗体的精确特异性 （4）非鼠源系统的人源单克隆抗体：人源杂交瘤技术等，保留天然的VH和VL；缺点：效率低下，不适用于大规模抗体库的全面筛选； （5）其他单克隆抗体技术：缺点：随机组合，可能非天然抗体； 3.单B细胞抗体筛选技术：从人的单B细胞扩增VH和VL区域的基因 优点：操作简便、所需细胞数量较少且能高效快速获得特异性单克隆抗体 缺点：仅适用于特定靶标分子 流程： （1）分离B细胞：从外周血或淋巴组织（如骨髓）随机或抗原选择性地分离单个B细胞； （2）抗原特异性B细胞：FACS分选等； （3）BCR转录本扩增：cDNA-->RT-PCR扩增-->全长Ig基因转录本；引物：IgH和IgL V基因正向引物，恒定区反向引物； （4）获取BCR序列，进行IgBLAST比对，确认V、D和J基因片段；BCR序列的突变、插入和缺失； （5）抗体的功能验证：表达、纯化蛋白质-->实现完整IgG分子的表达-->反应性特征 4.单B细胞抗体技术对B细胞免疫学机制的贡献 5.展望 （1）传统疫苗学：先分离抗原再测试免疫原性 （2）逆向疫苗学：基因组信息-->预测、筛选和验证抗原 （3）个体抗体库的高通量Ig基因序列测序